EIAV基因转移载体的优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 尹岚岚

作者： 尹岚岚;韩凌霞;李亚明;司昌德;于海波;徐佳;曲连东;冉多良

作者机构：

关键词： 马传染性贫血病毒;CAG启动子;WPRE;基因转移载体;绿色荧光蛋白

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2008 年 30 卷 03 期

页码： 183-189

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究在马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体pcPPTPRE(+)的基础上[含有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)和人乙型肝炎病毒转录后调控元件(HPRE)],对其转录后调控元件和外源基因启动子进行优化。参考土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)基因组序列和人巨细胞病毒增强子/鸡β-actin启动子序列(CAGp),设计合成2对引物,分别扩增WHV转录后调控元件(WPRE)和CAGp片段,正向插入pcPPTPRE(+)获得重组质粒pcPPTWPRE和pcPPTWCAG。将获得的EIAV转移载体pcPPTWPRE和pcPPTWCAG以及pcPPTPRE(+),脂质体法分别转染人胚肾细胞HEK293和鸡胚成纤维细胞系DF-1,转染后12 h、24 h、36 h、48 h在荧光显微镜下观察特异性绿色荧光的表达。48 h后收获细胞,利用流式细胞仪检测转染细胞中表达EGFP的阳性细胞。结果表明,在HEK293细胞中pcPPTWPRE和pcPPTWCAG的阳性细胞平均百分率均极显著高于pcPPTPRE(+)(P<0.01),pcPPTWCAG显著高于pcPPTWPRE(P<0.05);pcPPTWCAG的平均道数值极显著高于pcPPTPRE(+)和pcPPTWPRE,pcPPTWPRE显著高于pcPPTPRE(+)。在DF-1细胞中pcPPTWPRE和pcPPTWCAG的阳性细胞平均百分率均显著高于pcPPTPRE(+),而pcPPTWPRE和pcPPTWCAG的平均道数值均极显著高于pcPPTPRE(+),pcPPTWCAG显著高于pcPPTWPRE。本研究利用WPRE和CAGp优化构建了EIAV基因转移载体pcPPTWCAG,获得了较强的基因表达能力,为以鸡为宿主进行转基因研究提供了条件。

分类号： S852.65

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