PCR—RFLP筛选DNA文库克隆Btcry基因的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈中义

作者： 吴限;张杰;宋福平;管宇;黄大昉

作者机构：

关键词： 甜菜夜蛾;苏云金芽孢杆菌;微生物杀虫剂;DNA文库;cry基因;基因克隆;PCR-RFLP;农业害虫;杀虫活性;基因分离

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2003 年 36 卷 4 期

页码： 398-402

收录情况： CSCD

摘要： Bt菌株C002对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力，PCR-RFLP鉴定含有crylAa、cry2Ab、crylCa和未知杀虫蛋白基因cryX等，其中crylCa位于染色体DNA6～9kb的EcoR I片段。染色体和质粒DNA分别经EcoRI完全本科切和Sau3AI部分酶切，电泳回收6-9kb片段。E.coli-Bt穿梭载体pHT315分别与目的DNA连接，转化大肠杆菌感受态细胞后获得了相应的DNA文库，约50个转化子合为一个转化子池，采用PCR-RFLP方法快速检测，分别从约2000质粒DNA文库转化子和400个染色体文库转化子中筛选获得了crylAa,cry2Ab,crylCa和未知基因cryX的阳性克隆，相应命名为pHT-1Aa,pHT-1Ca,pHT-2Ab和pHT-X。限制酶切分析表明，含有crylAa,carlCa和cry2Ab基因的克隆片段均含有相应基因的保守物理图谱。进一步将这些质粒分别导入Bt无晶体空谈株CryB^-，SDS-PAGE分析表明，只有crylCa表达了约130ku杀虫晶体蛋白。初步杀虫生测结果显示，crylCa对甜菜夜蛾具有高毒力。7d校正死亡率为100。

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