沙门氏菌内标PCR快速检测试剂盒的研制与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李小玲

作者： 李小玲;刘斌;但现龙;王大鹏;周敏;史贤明

作者机构：

关键词： 沙门氏菌;聚合酶链式反应(PCR);扩增内标;检测试剂盒

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2011 年 44 卷 16 期

页码： 3395-3402

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】研制一种能有效指示假阴性的PCR检测产品,用于沙门氏菌快速、准确、灵敏的检测。【方法】针对沙门氏菌invA基因、stn基因序列分别设计引物与扩增内标,建立添加扩增内标的沙门氏菌PCR检测方法,组装试剂盒,并对试剂盒的各项性能进行评价。【结果】试剂盒对147株沙门氏菌和28株非沙门氏菌的检测结果显示,所有沙门氏菌均能扩增出362 bp的目标条带,非沙门氏菌仅扩增出520 bp的内标条带。试剂盒检测沙门氏菌基因组DNA的检测限为8.0 fg/PCR,检测染菌量为4—5 CFU/10 mL的牛奶样品,增菌8—10 h即得到阳性结果。反复冻融60次或-20℃下贮存1年,均不影响试剂盒的使用效果。对食品样品的检测结果显示,阳性检出率为2/30,与国标法的检测结果相符,比未添加扩增内标的PCR检测结果(阳性检出率为1/30)准确。【结论】采用添加扩增内标的PCR试剂盒检测沙门氏菌,特异性强、灵敏度高、稳定性好,并能有效指示假阴性,提高检测的准确性,适用于食品中沙门氏菌的快速筛检。

分类号： TS207.4`R155

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