肠出血性大肠杆菌O157:H7△hly△stx△toxB基因缺失株的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张雪寒

作者： 张雪寒;何孔旺;赵攀登;栾晓婷;叶青;温立斌;倪艳秀;周俊明;李彬;王小敏;郭容利;俞正玉;茅爱华;吕立新

作者机构：

关键词： 肠出血性大肠杆菌O157:H7;hly;stx;toxB;缺失株;小鼠;粘附

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2011 年 26 卷 05 期

页码： 79-85

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB)基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力。经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被壮观霉素(Spc+)、庆大霉素(Gm+)和卡那霉素(Kan+)基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,O157:H7(△hly△stx△toxB)检测不到相应的Stx、Hly和ToxB蛋白。O157:H7(△hly△stx△toxB)生长特性与亲本株无明显差异。对于HEp-2细胞的粘附能力明显降低。Balb/c小鼠排菌时间和排菌量明显减少和降低。本研究成功获得O157:H7(△hly△stx△toxB),并且明确Stx、Hly和ToxB的缺失导致了O157:H7对HEp-2细胞和Balb/c小鼠的粘附和定植能力降低。本研究旨在为研制EHEC O157:H7基因缺失疫苗奠定物质基础。

分类号： S852.61

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