载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A的表达及其DNA去甲基化功能鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 魏小乐

作者： 魏小乐;王晓霞;贾怀杰;景志忠;王永祥;谭继英

作者机构：

关键词： APOBEC3A;HIV-1启动子;DNA去甲基化;真核表达载体

期刊名称： 兰州大学学报(医学版)

ISSN： 1000-2812

年卷期： 2018 年 03 期

页码： 8-15

摘要： 目的真核细胞内,DNA甲基化调控在转座子沉默、基因表达调控、甚至病毒感染过程中起关键作用,其中HIV-1启动子的甲基化修饰在病毒潜伏感染中扮演重要角色。为明确载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A,A3A)对HIV-1启动子5'LTR上CpG岛甲基化程度的调节作用,本研究构建并筛选出A3A异构体A3A Isotype a(A3Aa)和A3A Isotype b(A3A-b)高表达真核载体,分析其去甲基化功能。方法从THP-1细胞mRNA中扩增得到A3A-a和A3A-b的c DNA,分别克隆至真核表达载体pASIB-HA和pCAGGS-HA。转染HEK-293T细胞,蛋白印迹法检测A3A-a和A3A-b的蛋白表达,并筛选出A3A-a和A3A-b的高表达载体。接着将A3A-a和A3A-b高表达载体与实验室构建并修饰的HIV-1启动子甲基化载体p-me LTR-EGFP共转染HEK-293T,检测指示蛋白EGFP在细胞水平中的表达,评价A3A-a和A3A-b的去甲基化调节作用。结果 PCR结果、酶切鉴定和测序结果均表明A3A真核表达载体pASIB-HA-A3A1-a、pCAGGS-HA-A3A2-a、pASIB-HA-A3A1-b、pCAGGS-HA-A3A2-b构建成功。经过筛选,pCAGGS-HA-A3A2-a和pCAGGS-HA-A3A2-b中A3A蛋白表达量最高,并用于后续实验。甲基化载体共转染实验显示,相较于对照A3G转染组,A3A-a和A3A-b组中EGFP的表达量明显上调。结论本研究在细胞水平上证实A3A分子Isotype a和Isotype b均可识别DNA中5-甲基化胞嘧啶,催化HIV-1启动子CpG岛去甲基化,为后续研究A3A对HIV潜伏感染调控奠定了基础。

分类号： R512.91

  • 相关文献

[1]基因组DNA去甲基化法改良蛹虫草菌株高产虫草素及性状稳定性评价. 朱巍巍,李莉,陈飞,李杨,王艳华,包永明. 2016

[2]DNA甲基化/去甲基化与哺乳动物胚胎的体外发育. 苏文龙,李璐,曹慧,倪俊卿,马亚宾. 2015

[3]TET介导的DNA主动去甲基化的机制与功能研究进展. 李文,曹俊国,陈敏,许保增. 2018

[4]民猪AMPD1基因的克隆与真核表达载体的构建. 徐兴超,张冬杰,汪亮,刘娣. 2011

[5]猪TLR5基因定点突变表达载体构建. 李海涛,陈月婵,牛艳春,李朋,刘娣,杨秀芹. 2012

[6]玉米抗草甘膦基因(sxglr-11)的构建与表达. 王艳梅,王陆军,白建荣,赵明. 2011

[7]含CpG序列PRRSV SD2 E基因真核表达载体质粒构建及表达. 温建新,李俊,周顺,任慧英,刘文华,邹玲,徐文,牛钟相,王金宝. 2008

[8]捻转血矛线虫Hc38保守结构域所在基因片段的真核表达载体构建. 郑金海,段正秀,荣光,薄新文,李娜,何立雄. 2009

[9]草原红牛AIDA基因克隆、生物信息学分析及真核表达载体的构建. 吕阳,曹阳,高一,刘理想,薛佳佳,张国梁. 2019

[10]猪miRNA-101真核表达载体的构建及定点突变. 张姣,邵思宇,李利族,汪亮,刘娣,杨秀芹. 2015

[11]绵羊肺腺瘤病毒缺失型SU蛋白真核表达载体的构建. 张月梅,马学恩,么宏强,赵世华. 2017

[12]民猪LPL基因真核表达载体的构建. 高丽峰,孙亚蒙,陈月婵,刘娣. 2012

[13]人溶菌酶基因的克隆及其真核表达载体的构建. 余露露,潘春留,关伟军,卿素珠. 2009

[14]虹鳟fabp10基因真核表达载体构建、生物信息学及组织表达分析. 任广明,林玉杰,徐黎明,赵景壮,邵轶智,卢彤岩. 2023

[15]微小隐孢子虫miR-2980真核表达载体的构建及初步鉴定. 呼高伟,程天印,米荣升,秦培兰,黄燕,周鹏,曹薇,陈兆国. 2012

[16]HIV包膜蛋白Gp120在果蝇Schneider 2细胞内的表达纯化及初步性质鉴定. 孙佩龙,周建华,吕淑霞,刘新奇. 2010

[17]银狐生长激素成熟mRNA真核表达载体的构建. 胡晓航,闫丽辉,杨传平,曹殿军,刘培欣,刘玉堂. 2005

[18]含禽源启动子的禽流感病毒核蛋白表达载体的构建及其免疫原性的检测. 王群,刘光亮,肖一红,童铁钢,白宇,张维军,徐树兰,吴东来. 2009

[19]绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建及在其原代成纤维细胞中的瞬时表达. 陆健,宋正海,吕延飞,赵福平,张莉. 2012

[20]民猪ZFAND5基因的克隆与真核表达载体构建. 孙洪涛,别墅,张冬杰,汪亮,刘娣. 2011

作者其他论文 更多>>

微信小程序