单链抗体对Cry1A类毒素的检测方法建立及识别差异初步研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曲婷婷

作者： 曲婷婷;张霄;董飒;刘贝贝;李盼;王耘;张存政;刘贤金

作者机构：

关键词： Cry1Ab;Cry1Ac;scFv;DAS-ELISA;分子对接

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2019 年 03 期

页码： 516-525

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种针对Cry1类毒素的经济高效的检测方法,本研究以杂交瘤细胞株2D10 cDNA为模板,通过重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR, SOE-PCR)技术构建单链抗体(single-chain variable fragment, scFv)基因,转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)表达并建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定(double antibody sandwich ELISA, DAS-ELISA)检测方法,通过分子对接模拟分析影响scFv与Cry1A类毒素结合的关键因素。结果成功构建了scFv基因,表达纯化出具有较高识别活性的scFv抗体(约28 kD),所建立的DAS-ELISA方法对Cry1Ab/Cry1Ac毒素的最低检测限(limits of determination, LOD)为20 ng/mL,分子对接结果显示,毒素的三维结构决定了其结合活性,氢键和疏水作用力在scFv与毒素结合过程中起重要作用。本研究利用基因工程抗体技术构建并表达获得了scFv抗体,建立了针对Cry1Ab/Cry1Ac毒素的双抗夹心ELISA检测方法,初步分析研究了scFv与Cry1Ac/Cry1Ab和Cry1Aa的识别差异机制,为进一步改造、研究开发新型广谱scFv提供了理论依据。

分类号： Q78

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