小反刍兽疫病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李林杰

作者： 李林杰;刘萍;马鹏;王悦萦;郭富城;马晓霞;周建华;柏家林

作者机构：

关键词： 小反刍兽疫病毒(PPRV);SYBR Green Ⅰ;实时荧光定量PCR

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2018 年 S1 期

页码： 84-88

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立一种快速检测小反刍兽疫病毒的方法。根据Gen Bank中公布的PPRV Nigeria75/1株H基因序列设计2对引物,PCR扩增出1 830 bpH基因,构建标准质粒p MD-18-H。以标准质粒优化反应条件,建立了小反刍兽疫病毒H基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。最优反应体系25μL:2×SYBR qPCR Mix 12. 5μL,模板DNA 1μL,特异引物各0. 2μL(0. 2μmol/L),DEPC H2O 10. 5μL;最佳反应条件:94℃2 min; 94℃5 s,57℃30 s,40个循环,Ct值与标准质粒模板浓度在3. 28×104～3. 28×10-2copies/μL 7个浓度梯度呈良好线性关系y=-2. 913x+36. 904,斜率为-2. 913,扩增效率120. 5%,相关系数R2=0. 994。建立的实时荧光定量PCR检测方法比普通PCR灵敏度高10 000倍,稳定性好,特异性强,对PPRV的准确诊断和定量检测具有重要意义。

分类号： S852.65

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