香蕉束顶病毒海口分离物NSP基因的原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 冯团诚

作者： 冯团诚;王健华;刘志昕

作者机构：

关键词： 香蕉束顶病毒;Gateway重组技术;NSP;原核表达

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2009 年 30 卷 09 期

页码： 1345-1350

收录情况： CSCD

摘要： 应用PCR方法从感染香蕉束顶病毒的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中克隆NSP(Nuclear shuttle protein)基因的编码区,并通过Gateway技术定向重组到原核表达载体pDESTTM-17中的6×His标签下游,经菌落PCR和测序鉴定结果表明,成功构建了原核表达载体pDESTTM-17-NSP。阳性克隆转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达、SDS-PAGE分析和western blot检测,结果显示,融合蛋白以包涵体的形式稳定表达,分子量约为20ku,与预计值相符。通过诱导条件的优化,确定了最佳的融合蛋白表达条件为25℃、0.1mmol/LIPTG条件下诱导4h。从而为制备NSP多克隆抗体和进一步研究NSP的功能奠定了基础。

分类号： S436.68

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