甘蓝型油菜丙酮酸激酶基因RNA干扰载体的构建(英文)

文献类型: 中文期刊

第一作者: 付三雄

作者: 付三雄;张超;陈松;周晓婴;戚存扣

作者机构:

关键词: 甘蓝型油菜;丙酮酸激酶;RNA干扰;载体构建

期刊名称: Agricultural Science & Technology

ISSN: 1009-4229

年卷期: 2014 年 05 期

页码: 39-44

摘要: 采用基因芯片技术,从油菜中鉴定了一个油分积累优势表达基因即丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)基因。为构建甘蓝型油菜PK基因的RNA干扰(RNAi)载体,通过设计引物克隆了PK基因长498 bp的siRNA靶序列,连接到pEASY-T1载体上,采用NotI和XhoI酶切,酶切产物连接到本课题组新近改造的RNAi平台载体pHurricane的NotI和XhoI位点,通过多重PCR鉴定证实载体构建成功,然后将上述PK基因反向重复框克隆到加入napin启动子的pCAMBIA1390表达载体相应的酶切位点上,构建具有种子特异性表达的PK基因的RNAi载体。限制性内切酶酶切证实载体构建成功,为进一步研究PK基因参与决定油菜油分积累的分子机理和代谢调控奠定了基础。

分类号: S565.4

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