猪细小病毒1型VP2基因的原核表达及反应原性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 欧云文

作者： 欧云文;马小元;张杰;丁耀忠;张永光;贾宁

作者机构：

关键词： 猪细小病毒1型;VP2基因;原核表达;反应原性

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2017 年 33 卷 03 期

页码： 169-174

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在研究猪细小病毒1型(PPV1)VP2蛋白(第155-439位氨基酸)的抗原性,为开发PPV1的检测方法奠定基础。以PPV1型AV31株的DNA为模板,扩增获得849 bp的目的片段,扩增产物克隆入p ET30a(+)原核表达载体,构建p ET30aPPV1-VP2(155-439 aa)重组质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3);在37℃,以1 mmol/L IPTG诱导表达6 h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性。SDS-PAGE分析表明,该VP2编码基因在大肠杆菌中得到表达,蛋白大小约为39 k D;Western blot检测结果表明,该重组蛋白与PPV1阳性血清发生特异性反应,与NA-PRRSV和PCV2阳性血清不发生交叉反应。该实验成功构建了PPV1-VP2(155-439 aa)原核表达载体,实现了在大肠杆菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的反应原性。

分类号： S852.651

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