与猪圆环病毒2型基因组茎环结构相互作用的宿主细胞蛋白的筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张辉

作者： 张辉;唐青海;危艳武;黄立平;张志慧;刘建波;吴洪丽;刘长明

作者机构：

关键词： 猪圆环病毒2型;茎环结构;宿主细胞;互作蛋白

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2013 年 12 期

页码： 1211-1216

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库,将总cDNA与pGADT7-Rec表达载体共同转化酵母诱饵菌株,通过同源重组在酵母细胞内同步进行cDNA文库的构建,以药物筛选阳性克隆;通过酵母菌落PCR得到阳性克隆中的cDNA插入片段,通过序列分析对此予以确认。本试验成功地构建了酵母单杂交文库,筛选出1.01×106个酵母克隆,其中196个为阳性克隆。经PCR产物测序,并通过NCBI Blast法进行序列比对,确定有4种蛋白可与PCV2基因组茎环序列发生作用。本研究从宿主细胞cDNA文库中筛选到4种可与PCV2基因组茎环序列发生作用的蛋白,为下一步阐明这些宿主蛋白对PCV2复制的调节作用奠定了基础。

分类号： S852.65

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