基于生长素诱导降解系统条件性敲除弓形虫ATG6蛋白的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈运通

作者： 陈运通;陈赫明;付佳雯;庞宇;郑君;贾洪林

作者机构：

关键词： 弓形虫;植物生长激素;条件性敲除;TgATG6

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2019 年 41 卷 010 期

页码： 1015-1020

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建生长素诱导降解系统的弓形虫条件性基因缺失虫株,本研究首先利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选获得TgKu80基因缺失虫株,然后采用该缺失虫株,利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选,将生长素诱导降解因子(AID)插入该弓形虫TgATG6基因序列的5'端得到TgATG6条件性敲除虫株TgATG6-iKD.PCR扩增及测序结果显示,以TgATG6-iKD虫株为模板可扩增出AID标签,而在野生型虫株中,不能有效扩增该靶序列,经测序验证也得到相符结果,表明AID标签序列能够高效定点插入到弓形虫TgKu80基因缺失虫株中;通过蛋白免疫印迹试验能够在TgATG6条件性敲除虫株检测到AID标签和TgATG6蛋白的融合表达;蛋白免疫印迹试验及间接免疫荧光实验结果显示,利用生长素(NAA)能够快速诱导融合表达蛋白的降解.本研究通过蛋白N端融合AID共表达,建立了高效条件性敲除弓形虫基因的方法,为进一步研究弓形虫相关基因的功能奠定基础.

分类号： S855.9

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