猪CD163 cDNA扩增及其稳定表达细胞系(CHO-K1)的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 徐建

作者： 徐建;霍珊珊;张建楼;张永红;崔丹;仲飞;李秀锦

作者机构：

关键词： 猪CD163;稳定表达细胞系;CHO-K1细胞;流式细胞术

期刊名称： 河北农业大学学报

ISSN： 1000-1573

年卷期： 2016 年 39 卷 04 期

页码： 88-92+122

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪CD163是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的重要受体之一。为探讨此受体在病毒感染过程中与PRRSV的相互作用,需要建立稳定表达猪全长CD163基因的细胞系。首先通过RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞中扩增猪全长CD163cDNA,然后通过KpnI和XhoI将其插入到pcDNA3.1A质粒中,构建成真核表达载体。将表达载体转染CHO-K1细胞,通过G418加压,筛选出在细胞膜上稳定表达猪CD163的细胞系。结果显示,扩增出的猪CD163基因与基因库的序列基本一致,个别碱基的突变没有引起编码氨基酸的改变。通过转染表达载体和G418筛选,成功构建了稳定表达猪全长CD163基因的CHO-K1细胞系。经流式细胞仪检测证实,重组猪CD163可在CHO-K1细胞膜上进行表达,这为进一步研究PRRSV与CD163受体相互作用提供了必要条件。

分类号： S852.65

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