鹅细小病毒vp1基因片段的原核表达及抗血清的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王静

作者： 王静;王懂帅;韩宗玺;卲昱昊;冉多良;刘胜旺;孔宪刚

作者机构：

关键词： 鹅细小病毒;vp1基因片段;原核表达;抗血清

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2006 年 14 卷 05 期

页码： 152-156

收录情况： CSCD

摘要： 利用PCR技术扩增了鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)HG5/82株vp1基因5'端长662bp的基因片段,将其克隆到pMD18-TSimple载体后,转化入大肠杆菌(Escherichiacoli)DH5α细胞。筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和HindⅢ将外源基因定向克隆到原核表达载体pPROEXTMHTb,所得的阳性重组质粒经序列测定,证明外源片段正确插入到pPROEXTMHTb的预期位置。将转入外源基因的工程菌经0.6mmol/LIPTG诱导,SDS-PAGE电泳表明,外源基因表达,融合蛋白分子量约为32kD。通过薄层扫描分析显示,融合蛋白表达量占工程菌菌体总蛋白的22.8%。经诱导后的工程菌用6mol/L盐酸胍裂解,再经超声处理后离心,用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化。纯化所得的融合蛋白免疫白兔,制备了兔抗鹅细小病毒结构蛋白的抗血清。Westernblot结果表明,抗血清与表达的融合蛋白及亲本病毒的VP1和VP2都具有反应性。

分类号： S852.5`S852.65

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