扬奇青霉α-半乳糖苷酶agl1基因在大肠杆菌中的表达与纯化研究

文献类型: 中文期刊

第一作者: 张波

作者: 张波;陈轶群;李志民;李一航;曹云鹤

作者机构:

关键词: 扬奇青霉;α-半乳糖苷酶;基因表达;蛋白纯化

期刊名称: 中国畜牧杂志

ISSN: 0258-7033

年卷期: 2009 年 45 卷 23 期

页码: 57-60

收录情况: 北大核心

摘要: 提取扬奇青霉总RNA,反转录合成cDNA,PCR扩增α-半乳糖苷酶agl1基因的编码区DNA序列,连接到原核表达载体pET28a(+)的多克隆位点,获得重组表达载体,转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导获得agl1基因的特异性表达。结果表明:8mol/L尿素变性处理后的重组蛋白,经过Ni2+亲和柱纯化,SDS-PAGE检测该重组蛋白分子量约82ku,与预测结果相符。纯化的酶蛋白依次经过6、4、2mol/L和0mol/L尿素梯度透析复性后,α-半乳糖苷酶酶活为0.4U/mL。

分类号: Q78

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