番茄细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌的四重PCR检测方法
文献类型: 中文期刊
第一作者: 康华军
作者: 康华军;柴阿丽;石延霞;谢学文;袁军海;李宝聚
作者机构:
关键词: 番茄;细菌性斑点病菌;溃疡病菌;青枯病菌;疮痂病菌;四重PCR
期刊名称: 园艺学报
ISSN: 0513-353X
年卷期: 2018 年 011 期
页码: 2254-2264
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 针对引起番茄细菌性病害的细菌性斑点病菌(Pseudomonassyringae pv. tomato,Pst)、溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis,Cmm)、青枯病菌(Ralstonia solanacearum,Rs)以及疮痂病菌(Xanthomonas campestris pv. vesicatoria,Xcv),建立了四重PCR检测技术,为病害的快速、准确诊断提供技术支持.根据gap1基因设计Pst特异性引物BW-F/BW-R,经PCR条件优化,扩增出了375bp的特异性片段.将设计的引物与已报道的3种细菌特异性引物组合,通过设定不同的退火温度、引物浓度、循环次数以及延伸时间,探索影响四重PCR扩增的因素,优化了其反应体系.四重PCR反应体系中的引物对BW-F/BW-R、Fan1/Fan2、RS-1-F/RS-3-R和XCVF/XCVR可分别扩增出细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌长度为375、146、716和517bp的特异性目的片段,反应体系退火温度为57.1℃,4对引物的终浓度分别为0.24、0.16、0.16和0.08μmol·L-1,延伸时间45 s,35个循环.该四重PCR反应体系可快速检测田间番茄发病植株中的细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌,灵敏度达到10-1 ng·μL-1.
分类号: S436.412
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