油菜乙酰乳酸合酶基因BnALS3的亚细胞定位、原核表达及其酶活分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 胡茂龙

作者： 胡茂龙;龙卫华;高建芹;陈锋;周晓婴;张维;陈松;张洁夫;浦惠明

作者机构：

关键词： 油菜;乙酰乳酸合酶;叶绿体信号肽;亚细胞定位;融合蛋白;原核表达;酶活

期刊名称： 中国油料作物学报

ISSN： 1007-9084

年卷期： 2018 年 03 期

页码： 309-317

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了研究油菜乙酰乳酸合酶基因BnALS3的亚细胞定位与酶学特性,以甘蓝型油菜(Brassica napus L.)品系N131为材料,采用RT-PCR法克隆到BnALS3的c DNA序列。该序列含有一个长度为1 959bp的开放阅读框,编码蛋白为652个氨基酸,在N端含有一个由49个氨基酸残基组成的叶绿体信号肽序列。将该信号肽序列构建至植物表达载体35S::BnALS3-GFP,利用拟南芥原生质体细胞进行瞬时表达,结果显示BnALS3蛋白定位在叶绿体中。构建去除叶绿体信号肽序列的BnALS3原核表达载体p Czn1-BnALS3,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE和Western Blot检测显示,在11℃条件下以终浓度为0.2mmol·L~(-1)的IPTG诱导8h后,p Czn1-BnALS3基因在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白His-BnALS3呈部分可溶性,分子量约为67k D。酶活分析表明,原核表达的His-BnALS3最适反应p H值为7.0,最佳反应温度为37℃,酶学常数Km值和Vmax值分别为6.55mmol·L~(-1)和6.40μmol·mg~(-1)·h~(-1)。

分类号： S565.4

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