猪流行性腹泻病毒S1基因在昆虫细胞中的表达与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨德强

作者： 杨德强;李慧春;陈鹏飞;王康;李先斌;张文超;虞凌雪;姜一峰;高飞;黄勤峰;于海;童光志;周艳君

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻病毒;S1蛋白;杆状病毒;Sf9细胞

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2017 年 03 期

页码： 18-22

收录情况： 北大核心

摘要： 本文以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株FJzz1/2011株的S1蛋白的切割位点设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增获得S1基因,将其克隆至转移载体p Fast Bac HTA中,获得了重组质粒p Fast Bac HTA-S1,将该重组质粒转化E.coli DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒r Bacmid-S1,再将重组穿梭质粒r Bacmid-S1转染Sf9细胞,48 h后即可观察到明显的细胞病变。将收获的r Bac-S1-P1代病毒在Sf9细胞上连续传3代后,收获细胞培养物,分别用间接免疫荧光鉴定(indirect immunofluorescence assay,IFA)、SDS-PAGE电泳和Western blot分析。结果显示,P3代重组病毒r Bac-S1感染的细胞均呈现亮绿色荧光,证实表达产物可以被PEDV阳性血清和抗S1蛋白的单抗特异性识别;SDS-PAGE电泳结果显示在大约120 k Da左右可观察到特异性条带;Western blot结果证实该蛋白可以被抗S1蛋白的特异性单抗识别。综上研究结果,证明利用杆状病毒表达系统在Sf9细胞中成功表达了PEDV的S1蛋白,为进一步研究PEDV S蛋白的抗原性奠定了基础。

分类号： S852.651

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