茶树黄酮醇合成酶基因的克隆与原核表达

文献类型: 中文期刊

第一作者: 马春雷

作者: 马春雷;陈亮

作者机构:

关键词: 茶树;黄酮醇合成酶;基因克隆;序列分析;原核表达

期刊名称: 基因组学与应用生物学

ISSN: 1674-568X

年卷期: 2009 年 28 卷 03 期

页码: 433-438

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 本研究采用EST测序技术和RT-PCR技术,获得了一个茶树茶多酚代谢中的重要基因——黄酮醇合成酶(FLS)基因,在GenBank登录(GenBank accessionNo.EF205150),其序列全长1317bp,其中开放阅读框长996bp,编码331个氨基酸,3'端有一个明显的多聚腺苷酸加尾信号,推测的蛋白分子量约为37.5kD,理论等电点为5.80。序列分析表明它与葡萄FLS基因序列的亲缘关系比较近。将该基因重组到表达载体pET-32a(+)中进行原核表达,经IPTG诱导、SDS-PAGE检测,结果表明茶树黄酮醇合成酶基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约61kD的外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量相符。用Ni-NTA亲和层析柱对融合蛋白进行纯化,得到了纯度在90%以上的纯化蛋白,为进一步研究PET-FLS融合蛋白的活性及功能奠定了基础。

分类号: Q943.2

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