紫茎泽兰高分子量核DNA制备方法的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张迎新

作者： 贾晓鸥;张月荣;杜向红;万方浩;宋卫宁

作者机构：

关键词： 紫茎泽兰;高分子量DNA;脉冲场凝胶电泳;大片段基因组文库

期刊名称： 西北植物学报

ISSN： 1000-4025

年卷期： 2011 年 31 卷 12 期

页码： 2551-2557

收录情况： CSCD

摘要： 以紫茎泽兰暗培养幼嫩叶片为材料,在细胞核提取缓冲液中加入PVP、抗坏血酸和氨基甲酸钠3种强抗氧化剂,较好地去除了多糖多酚等次生代谢物,经低熔点琼脂糖包埋细胞核及蛋白酶K原位裂解DNA胶块,以获得大分子量DNA;最后分别采用2种不同的限制性内切酶(BamHⅠ和HindⅢ)和5个浓度梯度(0U、0.2U、0.4U、0.6U、0.8U)进行酶切,并对不同的回收方法进行比较分析。结果表明:经脉冲电泳检测,本方法提取的DNA片段长度>600kb,基本无细胞器DNA和蛋白质污染;酶切条件以0.4U酶浓度HindⅢ的效果最好,酶切后的DNA片段主要集中在100～300kb之间,DNA片段大小满足构建BAC文库的要求;对回收方法进行比较分析,电洗脱法回收的大片段DNA浓度远远大于琼脂糖酶切法,大于8mg.L-1,这完全能够满足构建大片段基因组文库对DNA浓度的要求。

分类号： S451`Q943.2

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