表面展示棉铃虫钙粘蛋白基因细胞系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 颜晓

作者： 苏蕊;郑桂玲;梁革梅;张杰;万方浩;李长友

作者机构：

关键词： 钙粘蛋白;棉铃虫;转基因细胞系;GP64蛋白;蛋白表达

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2016 年 24 卷 05 期

页码： 755-763

收录情况： CSCD

摘要： 为研究苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白与其受体钙粘蛋白的相互作用,本研究利用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,Ac MNPV)囊膜蛋白GP64细胞膜锚定的特点,将172 bp的N端信号肽(GP64 signal peptide,gp64sp)和135 bp的C端膜锚定区域(GP64 C-terminal transmembrane domain,gp64ctd)连接,并在中间添加了一段含有6个酶切位点的序列,再连接到表达载体p IZ/V5-His,成功构建了一个使外源基因在细胞膜上表达的重组载体p IZ/V5-gp64。将扩增的3 882 bp的棉铃虫钙粘蛋白(Helicoverpa armigera cadherin,HaCAD)基因重复区和近膜区片段与重组载体p IZ/V5-gp64进行酶切和连接,构建重组载体p IZ/V5-gp64-HaCAD,将其转染棉铃虫细胞系Ha-E-1,通过筛选、细胞克隆和PCR验证,获得了重组钙粘蛋白基因的转基因细胞系Ha-T-CAD。免疫荧光法检测证实,钙粘蛋白在转基因细胞系Ha-T-CAD中成功表达。Western blot检测发现,在Ha-T-CAD细胞的膜蛋白中有140 k D大小的钙粘蛋白。转基因细胞系Ha-T-CAD的构建将为Bt杀虫晶体蛋白作用机理以及昆虫对Bt毒素的抗性机制研究提供基础资料。

分类号： S433

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