猪δ冠状病毒RBD蛋白在昆虫细胞中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张爽

作者： 张爽;郝鹏飞;伊立超;姜宇航;郝嘉翼;李乐天;时小双;徐鹏;金宁一;贾立军;李昌

作者机构：

关键词： 猪δ冠状病毒;杆状病毒;受体结合域;昆虫细胞

期刊名称： 畜牧与兽医

ISSN： 0529-5130

年卷期： 2021 年 009 期

页码： 103-108

收录情况： 北大核心

摘要： 为了获得具有天然构象且反应原性良好的猪δ冠状病毒（（PDCoV））受体结合域（RBD）蛋白,根据PDCoV流行株CC-HN2K-02株S蛋白编码序列,筛选、设计、优化并合成其RBD段DNA序列,将其亚克隆至杆状病毒双表达载体pFastBacTMDual上,获得pFBD-PDR重组质粒。将该重组质粒转化到DH10BacTM大肠杆菌感受态细胞中,进行2轮蓝白斑筛选并进行PCR鉴定获得阳性重组杆状质粒Bacmid-PDR;通过脂质体转染SF9细胞进行病毒拯救,出现明显病变后收取上清,并在正常SF9细胞中盲传3代,获得的杆状病毒命名为rBV-PDR。利用间接免疫荧光法（IFA）和Western blot检测rBV-PDR感染昆虫细胞后的蛋白表达情况。结果:重组质粒pFBD-PDR酶切验证正确,重组杆粒Bacmid-PDR构建成功,杆状病毒中能够表达PDR蛋白且能与Sterp-tag抗体发生特异性结合,IFA鉴定出特异性红色荧光,表明本试验成功表达了PDCoV-RBD蛋白,为深入开展PDCoV抗体的制备、新型疫苗、诊断试剂研发奠定了基础。

分类号： S852.651

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