Real-time PCR技术用于大菱鲆红体病虹彩病毒的组织敏感性检测及病毒流行情况调查

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴成龙

作者： 吴成龙;史成银;黄倢;孔晓瑜

作者机构：

关键词： 大菱鲆红体病虹彩病毒;实时定量PCR;SYBR GreenⅠ;定量检测;敏感组织

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2008 年 16 卷 05 期

页码： 28-34

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 大菱鲆红体病虹彩病毒(Turbot reddish body iridovirus,TRBIV)可引起大菱鲆病毒性红体病(viral reddish body syn-drome,VRBS)并导致养殖大菱鲆(Scophthal musmaximus)大量死亡。研究利用TRBIV主要衣壳蛋白基因序列设计的1对引物,结合内嵌式核酸染料SYBR GreenⅠ,建立了TRBIV特异的Real-timePCR检测方法。以10倍梯度稀释的含有TRBIV目的扩增片段的质粒作为标准,进行Real-time PCR反应以确定检测灵敏度,制备标准曲线。结果表明,该对引物具有较高的灵敏度和较强的特异性,能够检测相当于102数量级的TRBIV基因组拷贝,而不与健康大菱鲆组织DNA、淋巴囊肿病毒DNA发生交叉反应。应用建立的Real-time PCR检测方法,对TRBIV的组织敏感性检测和病毒流行情况调查。结果发现,大菱鲆的脾脏、肾脏、脑、鳃、心脏、肝脏、消化道、血液等组织中均可检测到TRBIV的存在,其中脾和肾是TRBIV的最主要的靶器官,每毫克组织的病毒含量分别高达5.23×106和2.18×106个。分子流行病学调查结果显示,山东半岛的多个大菱鲆养殖场中均存在TRBIV的感染和流行,感染鱼每毫克脾组织的病毒含量在1.27×102～2.33×106之间。研究建立了TRBIV Real-time PCR检测方法,灵敏度高,特异性好,可以进行定量分析,TRBIV的快速检测具有应用前景。

分类号： S943

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