陆地棉转录因子GhNAC7的克隆及功能分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： SHAHSyedTariq

作者： SHAHSyedTariq;范术丽;魏恒玲;庞朝友;李鸿彬;喻树迅

作者机构：

关键词： 陆地棉;NAM结构域;叶片衰老;GhNAC7;过表达

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2017 年 50 卷 03 期

页码： 426-436

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】从陆地棉中克隆GhNAC7,分析其结构和功能,研究其在棉花不同组织中以及叶片不同发育时期的表达量。并转入拟南芥进一步探究其在棉花叶片衰老过程中的作用。【方法】利用中国农业科学院棉花研究所棉花生物学国家重点实验室建立的棉花衰老叶片cDNA文库中的序列,获得1个含有NAM结构域的EST,使用Oligo6.71设计引物,重新在陆地棉叶片cDNA中进行克隆。使用Gene Structure Display Server软件分析GhNAC7结构,使用在线工具Plant CARE分析启动子序列,利用在线工具Gen Scan进行氨基酸序列翻译。同时,利用拟南芥基因组数据库(TAIR)进行序列比对,选取得分较高的NAC家族基因,使用MEGA 6.06软件和Gene Doc软件进行进化树分析和氨基酸比对。以XbaⅠ和SacⅠ为酶切位点构建35S::GhNAC7-GFP融合表达载体,分析其在洋葱表皮细胞中的瞬时表达,进行亚细胞定位。利用实时荧光定量PCR技术分析GhNAC7在棉花不同组织、不同叶片发育时期以及在200μmol·L~(-1) ABA调控下的表达量。通过构建p GhNAC7-GUS融合表达载体并转拟南芥,分析其启动子特异性。以Eco RⅠ和SalⅠ为酶切位点,利用p BI101和p BI121载体,分别构建融合表达载体并转拟南芥进行过表达分析。【结果】从陆地棉中成功克隆GhNAC7,其全长为1 064 bp,包含3个外显子,2个内含子。生物信息学分析结果表明,GhNAC7开放阅读框为834 bp,可编码277个氨基酸,其蛋白质分子量为31.35 k D,等电点为9.22。结构域分析表明其属于NAC转录因子的NAM亚家族,进化树分析显示GhNAC7与ANAC041、ANAC083同源性最高,其中,GhNAC7与ANAC083结构域位置均为17—58 aa。其启动子核心元件包含一系列与衰老、激素、胁迫相关的顺式作用元件。亚细胞定位表明其蛋白为核蛋白。组织特异性表明GhNAC7在真叶、子叶、花、花药和衰老真叶中均明显表达,其中在衰老的真叶中表达量最高。启动子特异性分析表明,其GUS活性在衰老的叶片中最强。在拟南芥中过表达该基因,转基因植株比野生型表现出明显的衰老症状。荧光定量PCR分析表明,ABA处理后6 h GhNAC7明显上调表达,并在48 h表达量达到最高,这表明ABA可调控GhNAC7表达从而调节棉花叶片衰老。【结论】GhNAC7可以促进棉花叶片衰老并受ABA的调控。

分类号： S562

  • 相关文献

[1]陆地棉转录因子GhNAC78基因的特征及功能分析. 范术丽,宋美珍,庞朝友,郭亚宁,李黎贝,魏恒玲,喻树迅. 2014

[2]转山菠菜胆碱单加氧酶基因(AhCMO)水稻创制及其耐盐性研究. 罗伯祥,肖自友,邓力华,陈芬,陈受宜,李文彬,肖国樱. 2010

[3]向日葵转录因子HB-12的定位分析及过表达验证. 孙瑞芬,张艳芳,郭树春,李素萍,于海峰,聂惠,牛素清,乔慧蕾,安玉麟. 2018

[4]OsbHLH1基因过表达载体构建及转化水稻研究. 罗伯祥,邓力华,陈芬,陈受宜,李文彬,肖国樱. 2009

[5]低磷条件下过表达OsPHF1基因对粳稻农艺性状的影响. 胡张华,刘秀艳,王玉锋,彭瑜,史晓亮,滕胜. 2018

[6]草莓蔗糖转运基因FaSUT5对“申阳”草莓果实糖分积累的影响. 吕文远,张玲,王延秀,高清华,段可. 2018

[7]过表达OsMPK17激酶蛋白质增强了水稻的耐旱性. 马金姣,兰金苹,张彤,陈悦,郭亚璐,刘玉晴,燕高伟,魏健,窦世娟,杨明,李莉云,刘国振. 2020

[8]山羊环状RNA circ_ZCCHC24表达载体的构建及对颗粒细胞增殖的影响. 陶虎,张元,杨娟,张年,熊琪,刘洋,陈明新. 2019

[9]利用重组腺病毒过表达PPARγ对牛肌肉细胞脂质沉积的影响. 滑留帅,王璟,徐照学,王二耀,陈宏. 2020

[10]烟草Hsc70-2的克隆及对马铃薯Y病毒侵染烟草的促进作用. 龚明月,段啸天,余婷婷,王杰,申莉莉,李莹,刘明宏,李永亮,吕洪坤,章松柏,杨金广. 2020

[11]猪OLR1基因对肌内前脂肪细胞分化的影响. 乔木,黄藏宇,吴俊静,武华玉,万绪玲,周佳伟,刘贵生,梅书棋,彭先文. 2020

[12]红曲菌MpigE基因过表达质粒的构建. 郑学海,柳燕,朱锦懋,杨成龙,陈由强,陈建楠. 2020

[13]猪CISH基因过表达对IL-6和TNF-α基因mRNA的表达调控研究. 邢桂玲,高晓雯,寇明星,郭东春,王希彪,牛步月. 2019

[14]牛Sry亚细胞定位及其对Sox9基因表达的影响. 韩凤桐,吴宁,廖冰,林秀坤,刘娣. 2008

[15]胁迫相关蛋白激酶OsSAPK9调控水稻对铝胁迫的反应. 陈腾君,曾丹,张帆,周永力,石英尧,黎志康. 2018

[16]紫茎泽兰类黄酮3′-羟化酶在烟草中的表达. 张松焕,郭惠明,裴熙祥,李春奇,程红梅. 2009

[17]慢病毒载体介导的IGF2b基因在鲤鱼背部肌肉组织中过表达对鲤鱼生长的影响. 张宁,苏胜彦,袁新华,马庆男,董在杰. 2015

[18]芝麻硬脂酸脱饱和酶基因SiSAD的克隆及功能验证. 周瑢,刘盼,黎冬华,张艳欣,王林海,张秀荣,魏鑫. 2019

[19]粉红螺旋聚孢霉67-1转几丁质酶基因高效工程菌株的构建与筛选. 李世东,孙漫红. 2015

[20]单子叶植物RNA干扰和过表达Gateway载体的构建. 毕惠惠,王根平,王成社,夏兰琴. 2013

作者其他论文 更多>>

微信小程序