苏云金芽胞杆菌Cry1Ba蛋白定点突变对杀小菜蛾活性的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 林承喜

作者： 束长龙;翟元娜;林毅;宋福平;张杰

作者机构：

关键词： Cry1Ba3;定点突变;生物活性测定;小菜蛾;CrylBa3; site-directed mutation; bioassay; Plutella aylostella

期刊名称： 植物保护

ISSN： 0529-1542

年卷期： 2011 年 37 卷 006 期

页码： 75-81

收录情况： CSCD

摘要： Cry1Ba3是由本实验室发掘的对小菜蛾有高毒力的杀虫晶体蛋白.为了寻找对杀虫活性有重要影响的氨基酸,为杀虫机理研究和改造杀虫蛋白提供理论依据,本研究利用P61eBio-InfomlatiqueLyonnais数据库对Cry1Ba3的二级结构进行模拟;采用BioEdit软件分析Cry1Ba3的疏水区;将Cry1Ba3与CrylAal、Cry2Aal、Cry3Aal以及Cry4Bal进行多序列比对,从而确定了20个氨基酸突变位点.利用半重叠引物PCR的方法对Cry1Ba3进行定点突变,将突变体在大肠杆菌BL21中进行诱导表达.通过浸叶法对各个突变蛋白杀小菜蛾的生物活性进行测定.获得的20个Cry1Ba3突变体均能在大肠杆菌BL21中表达,并以包涵体形式存在.杀虫活性测定结果表明M6(R192L)、M10(W303A)、M19(H485G)对小菜蛾的活性明显降低,二级结构预测表明活性降低的突变蛋白的构象均发生明显变化,其余17种突变蛋白的活性和二级结构都没有明显变化.说明第192位的精氨酸、第303位的色氨酸和第485位的组氨酸对Cry1Ba3的杀小菜蛾活性有重要影响,上述3个位点氨基酸突变引起的蛋白活性减低可能与毒素的空间结构变化有关.

分类号： S476.11

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