木薯MeCREB基因的分子克隆及其在原核细胞中的表达和优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王硕

作者： 王硕;刘姣;符少萍;段瑞军;李瑞梅;姚远;胡新文;郭建春

作者机构：

关键词： 木薯;MeCREB;基因克隆;原核表达;条件优化

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2018 年 10 期

页码： 3168-3173

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究以木薯为材料,通过RT-PCR克隆出了MeCREB基因,核酸序列分析表明,所克隆的基因与phytozome数据库收录的MeCREB基因(Manes.04G058300.1)序列基本一致。MeCREB基因全长968 bp,其中开放性阅读框(ORF)为747 bp,编码248个氨基酸,预测得出MeCREB蛋白是一个不稳定的亲水性蛋白,编码蛋白质的分子量为26.26 kD,理论等电点为5.99,GRAVY为-0.667。构建MeCREB-pGEX-6p-1表达载体,在大肠杆菌中进行诱导表达,并对影响重组蛋白表达的4个主要因素(诱导温度,诱导起始菌量,IPTG浓度及诱导时间)进行优化,确定GST-MeCREB融合蛋白的最适表达条件。结果表明:重组工程菌生长至OD600=0.8时加入终浓度为0.1 mmol/L的IPTG,在28℃下诱导6 h,最适合GST-MeCREB融合蛋白的表达。本研究为高效诱导获得GST-MeCREB融合蛋白用于下游实验提供了最优方案,并为进一步研究MeCREB基因的生物学功能奠定了基础。

分类号： Q943.2`S533

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