永生化绵羊肺成纤维细胞系的构建及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘腾

作者： 刘腾;董丹丹;张莉;朱杰;缪秋红;刘光清

作者机构：

关键词： 绵羊肺成纤维细胞;人端粒酶逆转录酶;永生化

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2018 年 26 卷 02 期

页码： 54-58

收录情况： 北大核心

摘要： 为了利用携带人源端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,h TERT)基因的慢病毒表达系统将原代绵羊肺成纤维细胞进行永生化。本研究利用PCR技术从p Babe-neo-h TERT中扩增h TERT基因,并利用infusion技术构建重组慢病毒表达载体p LOV-puro-h TERT。将重组慢病毒三质粒系统共转染293T细胞,拯救出慢病毒颗粒并感染原代绵羊肺成纤维细胞,经嘌呤霉素抗性筛选获得阳性克隆,分别应用RT-PCR和Western blot方法检测传代细胞系中h TERT基因的转录和表达水平。筛选获得的阳性克隆,命名为SLT细胞系。SLT细胞系连续传代后RT-PCR及Western blot检测均显示h TERT稳定表达。本研究表明,我们成功构建了永生化绵羊肺成纤维细胞系。

分类号： Q813

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