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大黄鱼(Pseudosciaena crocea)热激蛋白的基因克隆、原核表达及抗血清的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 张祖兴 1 ; 李明云 1 ; 陈炯 2 ; 邬勇 1 ;

作者机构： 1.宁波大学生命科学与生物工程学院

2.浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所

关键词： 大黄鱼;热激蛋白基因;原核表达;抗血清

期刊名称： 海洋与湖沼

ISSN： 0029-814X

年卷期： 2006 年 37 卷 04 期

页码： 337-341

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 应用trizol裂解法提取象山港网箱养殖大黄鱼肝脏总RNA,采用RTPCR获得大黄鱼cDNA;通过设计特异引物进行PCR扩增,将PCR产物转化到质粒并直接测序,得到1.7kb的目的基因;同时将此目的基因连接到表达质粒pSBET中,在大肠杆菌BL21中进行诱导表达以及表达产物的分析。克隆基因的表达产物经SDSPAGE分析表明,HSP基因的蛋白分子量为60kDa左右,与阅读框的编码大小一致;表达蛋白经纯化后免疫小鼠制备抗血清。Westernblotting检测结果表明,制备的抗血清与HSP蛋白起较强的特异性反应。HSP基因的系统进化分析表明,大黄鱼与非洲爪蟾最为接近,从侧面印证了脊椎动物中两栖纲动物与鱼纲动物的亲源关系。通过大黄鱼HSP基因的提取和分析,可为以后制备出核酸探针、筛选和克隆出一批具有优良性状的基因、构建基因文库等研究工作奠定基础。

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