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利用微滴数字PCR方法快速分析转基因玉米中外源基因的拷贝数

文献类型： 中文期刊

作者： 姜志军 1 ; 江颖 1 ; 徐摇光 1 ; 张立全 1 ; 张晓东 1 ;

作者机构： 1.北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心

关键词： 转基因玉米;G23V-EPSPS基因;抗草甘膦;ddPCR

期刊名称： 生物技术进展

ISSN： 2095-2341

年卷期： 2016 年 6 卷 04 期

页码： 288-294

摘要： 以玉米自交系501幼胚为受体材料,首先将来自球形节杆菌的EPSPS基因(G23V)按玉米密码子偏爱性进行优化与人工合成,并且将其克隆到表达载体pBAC9200中;然后利用农杆菌介导法将质粒载体转入玉米自交系501的幼胚中。经过愈伤诱导、草甘膦抗性筛选和分化培养最终获得14株转化再生植株。经PCR、RT-PCR检测表明,其中5株目的基因G23V-EPSPS稳定整合且在转录水平获得表达。随后,利用微滴数字PCR技术对外源基因拷贝数进行了检测分析,分析结果表明在5株阳性转基因植株中,外源基因G23V-EPSPS拷贝数分别为0.12、1.0、0.9、1.89和0.66,介于0~2之间。成功建立了草甘膦抗性基因G23V-EPSPS在玉米中的遗传转化体系,为以新型高抗草甘膦G23V-EPSPS基因作为转基因玉米筛选标记基因奠定了基础;而且以微滴数字PCR技术代替传统的Southern Blot简便快速的完成外源基因拷贝数的分析,为微滴数字PCR技术在转基因外源基因拷贝数检测上的广泛应用做了初步的探索。

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