文献类型： 中文期刊

作者： 吕新^{1,2 1} ; 刘兰英^{1,2 2} ; 李玥仁^{1,2 2} ; 罗土炎^{1,2 2} ;

作者机构： 1.1.福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所

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关键词： Taq DNA聚合酶;表达与纯化;宿主DNA残留

期刊名称： 福建农业科技

ISSN： 0253-2301

年卷期： 2025 年 56 卷 005 期

页码： 1-6

摘要： 为彻底去除Taq DNA聚合酶中的大肠杆菌宿主DNA残留，旨在开发一种高效的表达与纯化策略，以满足分子生物学研究和临床应用对高纯度Taq DNA聚合酶的需求。采用pET-15b质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达Taq DNA聚合酶，通过IPTG诱导实现目标蛋白的高水平表达，并结合Ni-NTA亲和层析与DEAE阴离子交换层析的纯化策略，实现对表达产物的高效纯化。结果表明：优化后的流程成功获得纯度超过95%的Taq DNA聚合酶；PCR检测大肠杆菌16S rRNA基因结果显示，自制Taq DNA聚合酶中未检出宿主DNA，其残留量与市售Taq DNA聚合酶相当。与传统的热失活结合硫酸铵沉淀或单一Ni-NTA亲和层析方法相比，优化的纯化流程能够更彻底地去除大肠杆菌宿主DNA残留，为高纯度Taq DNA聚合酶的制备提供了一种高效、可行的新策略。