文献类型： 中文期刊

作者： 南黎 ¹ ; 黄叶娥 ² ; 肖琛闻 ² ; 王志鹏 ² ; 韦强 ² ; 季权安 ² ; 李科 ² ; 刘燕 ² ; 鲍国连 ² ;

作者机构： 1.浙江师范大学化学与生命科学学院

2.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 细菌外膜囊泡;支气管败血波氏杆菌;制备工艺;蛋白质成分分析

期刊名称： 浙江大学学报(农业与生命科学版)

ISSN： 1008-9209

年卷期： 2021 年 002 期

页码： 251-260

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在确立兔波氏杆菌外膜囊泡（outer membrane vesicles, OMVs）最佳制备工艺。以兔波氏杆菌毒力较强菌株FX-1为研究对象,筛选出制备OMVs的最优方法,并对培养时间、抗生素添加量及过滤方法进行逐一优化。采用透射电镜（transmission electron microscope, TEM）、扫描电镜（scanning electron microscope, SEM）、纳米颗粒追踪分析（nanoparticle tracking analysis, NTA）等方法分析OMVs的理化性质;采用考马斯亮蓝法（Bradford法）、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE）及液相色谱-串联质谱法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS）检测OMVs的蛋白质含量及组分。试验结果显示,超滤浓缩法是制备兔波氏杆菌OMVs的较适方法,采用该方法的最佳培养时间、头孢氨苄质量浓度和过滤方法分别为18 h、64μg/mL和0.45μm滤膜过滤一次。制得的OMVs呈纳米级球形囊泡,平均直径为127.83 nm±0.68 nm。蛋白质分析结果表明,OMVs上包含多种与兔波氏杆菌毒力和感染机制有关的蛋白质。该制备工艺能够显著提高兔波氏杆菌OMVs的产量,为其工业化生产提供了可能;对其结构和蛋白质成分的分析,为研发新型亚单位疫苗提供了科学依据。