文献类型： 中文期刊

作者： 高彦萍 ¹ ; 吕和平 ¹ ; 张武 ¹ ; 王国祥 ² ; 吴雁斌 ¹ ; 梁宏杰 ¹ ;

作者机构： 1.甘肃省农业科学院马铃薯研究所

2.甘肃省农业科学院中药材研究所

关键词： 马铃薯卷叶病毒;反转录环介导等温扩增;反转录聚合酶链式扩增;检测

期刊名称： 核农学报

ISSN： 1000-8551

年卷期： 2020 年 009 期

页码： 1943-1950

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种快速准确检测马铃薯卷叶病毒(potato leafroll virus,PLRV)的方法,本研究以PLRV CP(coat protein,CP)基因ORF3保守序列为靶标,建立了PLRV反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系,并对建立的RT-LAMP检测体系的特异性、灵敏度、实际应用效果进行评估.结果表明,建立的PLRV RT-LAMP检测方法,在62℃恒温下扩增50 min,扩增产物中加入双链嵌合荧光染色(SYBR GreenⅠ),阳性样品颜色变为绿色,阴性样品颜色仍为褐色,可直接目测判断待检测样品是否感染PLRV.该方法只特异性检测PLRV,不与马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯M病毒(PVM)等其他5种马铃薯主要病毒发生交叉反应.此外,建立的PLRV RT-LAMP检测方法的灵敏度较反转录PCR(RT-PCR)方法高100倍.田间样品检测验证,该方法与标准RT-PCR方法符合率达100%.本研究建立的以SYBR GreenΙ为颜色指示的PLRV可视化检测RT-LAMP方法,特异、灵敏、便捷,成本低,可满足科研、基层单位对该病毒快速诊断和检测的需要.