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益智ISSR-PCR反应体系建立与优化

文献类型： 中文期刊

作者： 刘晓静 1 ; 王文泉 1 ; 郭凌飞 2 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

2.中国热带农业科学院南亚热带作物研究所

关键词： 益智;ISSR-PCR;正交设计;单因素试验;体系优化

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2008 年 18 卷 03 期

页码： 33-37

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:获得适合的益智ISSR-PCR扩增反应体系。方法:利用正交设计L16(45)和单因素试验对益智ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTPs,引物)在4个水平上进行优化试验,将二者所得结果进行综合比较分析。结果:最终获得益智ISSR-PCR反应的最优体系(20μl)为:模板DNA100ng,Mg2+3.0mmol/L,引物0.8μmol/L,dNTPs0.25mmol/L,TaqDNA聚合酶1.0U。最后,对益智ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火,得到最佳退火温度为50℃。结论:这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术研究分析益智遗传多样性奠定基础。

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