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土壤镰刀菌种群检测的巢式PCR-DGGE方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 程晓亮 1 ; 纪莉景 2 ; 王连生 2 ; 栗秋生 2 ; 朱杰华 1 ; 孔令晓 2 ;

作者机构： 1.河北省农业大学

2.河北省农林科学院

关键词： 土壤微生物;镰刀菌;PCR-DGGE;优化

期刊名称： 河北农业大学学报

ISSN： 1000-1573

年卷期： 2010 年 33 卷 04 期

页码： 93-97

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本试验比较了4种提取小麦-玉米轮作免耕田土壤DNA的方法,并对巢式PCR反应体系和扩增条件进行了优化,建立了适合检测土壤中镰刀菌多样性的PCR-DGGE体系。结果表明:土壤DNA的质量是影响PCR扩增结果的关键因子,试剂盒Fast DNA SPINfor Soil所提土壤DNA片段接近23 bp,A260/A280比值为1.84,DNA产量为18.1μg/g,更适合进行PCR反应。DNA模板的浓度决定PCR扩增结果,第一轮PCR扩增的DNA模板适宜量为2～5 ng,以第一轮PCR产物的原液为模板进行第二轮PCR扩增,在退火温度为67℃时扩增结果最好。PCR产物在变性范围为45%～60%的丙烯酰胺梯度凝胶中电泳7～8 h,其条带能够完全分离,可以用作土壤中镰刀菌多样性的检测。

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