文献类型： 中文期刊
作者： 李晓君 1 ; 王俊刚 2 ; 武媛丽 1 ; 张树珍 2 ;
作者机构： 1.海南大学农学院
2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所:甘蔗研究中心
关键词： ShSAP1;pTCK303;载体;RNA干扰;基因功能
期刊名称： 热带作物学报
ISSN： 1000-2561
年卷期： 2011 年 32 卷 06 期
页码： 10-14
收录情况： CSCD
摘要： 植物中具有A20/AN1锌指结构域的蛋白参与了逆境应答,为研究甘蔗A20/AN1型锌指蛋白基因ShSAP1的功能及在甘蔗抗逆育种方面的价值,本研究通过构建ShSAP1基因的RNAi载体并进行甘蔗的遗传转化,以期通过反向遗传学进行ShSAP1的功能分析。将ShSAP1锌指编码区片段分别以正向和反向插入到中间载体pTCK303内含子的两侧,构建中间载体pTCK-iShSAP1,而后把干扰片段连入pCAMBIA-GUS中,获得RNAi表达载体pCAMBIA-iShSAP1,将该载体转导根癌农杆菌EHA105,通过农杆菌介导法侵染甘蔗胚性愈伤组织,并对部分转化幼苗进行了初步的PCR鉴定。经过限制性内切酶分析和测序验证,RNAi载体pCAMBIA-iShSAP1构建成功;转化幼苗经PPT抗性筛选后,获得了58株抗性植株,对抗性幼苗进行了Bar基因的PCR检测,得到6株PCR阳性植株。本研究完成了ShSAP1的RNAi载体构建及对甘蔗的遗传转化,为ShSAP1的功能研究打下了一定的基础。
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