文献类型： 中文期刊
作者： 林珲 1 ; 朱海生 1 ; 温庆放 1 ; 黄丽芳 1 ;
作者机构： 1.福建省农业科学院作物研究所/福建省农业科学院蔬菜研究中心/福建省蔬菜工程技术研究中心
关键词： 花椰菜;actin;基因克隆;表达分析;内参基因
期刊名称： 植物遗传资源学报
ISSN： 1672-1810
年卷期： 2019 年 003 期
页码：
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 实时荧光定量PCR技术是探索植物基因功能和调节机理的有效手段.选择合适的内参基因是获得实时荧光定量PCR准确性数据的必备条件.ACT基因高度保守且表达稳定,常作为内参基因被广泛应用.为了获得花椰菜ACT基因,以转录组测序和RT-PCR方法为手段克隆得到花椰菜肌动蛋白基因Actin.该基因等电点为5.395,理论分子量为41.77 kD;其cDNA开放阅读框长1134 bp,编码氨基酸377个,GenBank登录号为MG598643.Wolf Psort分析发现,BobActin蛋白亚细胞定位于细胞质基质中.Motif Scan分析显示,BobActin蛋白质的氨基酸序列4~377位为Actin保守结构域.进化分析表明,同源序列基因编码的蛋白质与同为十字花科的甘蓝、芜菁和油菜同源蛋白的相似性达到90%以上,具有高度的保守性.在此基础上,设计了1对荧光定量PCR引物,分析显示,该引物具有较高的特异性和扩增效率,在花椰菜根、茎、花、花球、叶片等不同组织和低温、高温、盐处理、干旱处理、ABA处理等胁迫处理下均能稳定表达,适合在花椰菜基因表达研究中作为内参基因,为开展花椰菜重要功能基因的挖掘、表达模式以及调控机理的研究提供参考.花椰菜在内参基因方面的研究还处于初步阶段,今后可继续克隆其他内参基因,丰富花椰菜的内参基因库,从而进一步提高花椰菜基因表达分析研究的稳定性、重复性和准确性.
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