文献类型： 中文期刊

作者： 满坤 ¹ ; 杨兵 ² ; 薛静 ³ ; 覃湘婕 ⁴ ; 周宏专 ² ;

作者机构： 1.北京市农林科学院

2.北京市农林科学院畜牧兽医研究所

3.北京农业生物技术研究中心

4.北京农学院动物科学技术学院

关键词： 猪流行性腹泻病毒;中和抗原表位;转基因玉米;表达

期刊名称： 中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2014 年 16 卷 06 期

页码： 28-35

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以玉米为生物反应器,将猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)主要中和抗原表位(core neutralizing epitope,COE)基因导入玉米自交系,获得了高效表达PEDV-COE的转基因玉米稳定株系。首先,根据玉米密码子的偏好性,设计合成优化的COE编码基因,构建了植物表达载体p BAC9036。然后,利用PDS1000/He基因枪转化玉米幼胚,经过愈伤组织诱导、分化再生培养,获得71株转化再生植株,进而通过田间草甘膦抗性筛选,获得2个T1代转基因玉米稳定株系。通过PCR、RT-PCR、间接ELISA和Western blot等鉴定结果显示,COE基因已成功整合到玉米基因组并进行了转录和蛋白表达。并且种子中COE蛋白占可溶性总蛋白的0.122%和0.078%。最后,提取转基因玉米稳定株系的种子可溶性蛋白,与佐剂混合皮下注射免疫小鼠并取可溶性蛋白灌胃免疫小鼠,均可产生针对PEDV抗原的特异性抗体。获得的转基因玉米可有效表达COE蛋白,表达产物具有显著的免疫原性,为进一步研制PEDV-COE转基因玉米疫苗奠定了基础。