文献类型： 中文期刊

作者： 赵丽 ¹ ; 王凤龙 ¹ ; 杨慧 ² ; 李鹏 ² ; 李霞 ² ;

作者机构： 1.内蒙古农业大学动物科学与医学学院

2.北京市农林科学院蔬菜研究中心

关键词： 重金属;锌;螯合抗原;单克隆抗体;间接酶联免疫吸附法

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2011 年 0 卷 07 期

页码： 214-220

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过双功能螯合剂S-2-(4-异硫氰苄基)-二乙烯三胺五乙酸(ρ-SCN-Bn-DTPA)将锌离子(Zn2+)分别与载体蛋白匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)偶联。通过二喹啉甲酸(bicin-choninic acid,BCA)法测抗原蛋白浓度,对抗原、KLH和BSA分别进行紫外分光光度计扫描,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)进行定性鉴定,利用石墨炉原子吸收分光光度法检测抗原中Zn2+含量等,成功获得了免疫抗原Zn-DTPA-KLH和检测抗原Zn-DTPA-BSA、DTPA-BSA。用Zn-DTPA-KLH免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合,极限稀释法亚克隆,间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)筛选,获得了1株稳定分泌抗重金属锌抗体的杂交瘤细胞株(Z1A5)。Z1A5染色体数目在100以上,所分泌的抗体为IgM亚类,轻链为kappa型,腹水型抗体效价高达1∶51 200。本研究为锌离子残留免疫学检测方法的建立提供了物质及技术基础,对提高风险评估工作的效率和质量,保障食品安全有重要现实意义。