文献类型： 中文期刊

作者： 高美红 ¹ ; 白佳桦 ¹ ; 肖霖力 ¹ ; 杨凌 ¹ ; 许晓玲 ¹ ; 刘彦 ¹ ;

作者机构： 1.北京市农林科学院畜牧兽医研究所;河北工程大学

关键词： 牛成纤维细胞;分离培养方法;比较;细胞鉴定;细胞增殖

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2022 年 01 期

页码： 17-21+26+134

收录情况： 北大核心

摘要： 为了获得牛成纤维细胞最佳体外分离培养方法并建立成纤维细胞特征鉴定方法,试验采集牛耳皮肤组织块,利用眼科剪修剪成大小为0.5～2 mm~3的组织块,分别采用组织块贴壁法、胶原酶Ⅱ+组织块黏附法、双酶消化法(胰蛋白酶+胶原酶Ⅱ)+组织块黏附法进行原代牛耳成纤维细胞的分离培养,观察各方法培养的细胞生长情况,利用成纤维细胞特异性标志蛋白(波形蛋白)免疫荧光方法对分离获得细胞的纯度进行鉴定,采用CCK-8试剂盒对传代细胞增殖情况进行检测,绘制增殖曲线。结果表明:组织块贴壁法在培养至第7天,开始有成纤维细胞缓慢游出,并向组织块周围迁移;培养至第17天,细胞大约汇合至培养皿的80%。胶原酶Ⅱ+组织块黏附法培养至第3天时,在镜下可观察到呈絮状团块、圆形的细胞;培养至第5天时,细胞迅速生长,并且呈梭形、胞质伸展、胞核清晰、单层融合;培养至第11天时,絮状团块和培养皿边缘的细胞出现放射样和旋涡样生长晕,汇合至培养皿的70%～80%。双酶消化法+组织块黏附法培养至第3天时,在镜下观察到细胞大多呈梭形;培养至第5天时,细胞开始逐渐增加,同时细胞迁移数量、聚集程度都明显优于胶原酶Ⅱ+组织块黏附法;培养至第9天时,细胞出现旋涡样生长晕,大约汇合至培养皿的80%,可进行传代纯化。细胞染色呈阳性,且纯度高达98%。增殖曲线呈典型的S形,且2～5 d是细胞的最佳增殖期。说明通过双酶消化法+组织块黏附法可以快速分离、获得牛耳成纤维细胞,是最佳的牛成纤维细胞分离培养方法。