文献类型： 中文期刊

作者： 金珂宇 ¹ ; 王梦晶 ¹ ; 沈诗燚 ¹ ; 武婧雨 ¹ ; 李岳谦 ¹ ; 郭俭 ² ; 王教瑜 ³ ; 李玲 ¹ ;

作者机构： 1.浙江农林大学 现代农学院

2.浙江农林大学 食品与健康学院

3.浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所

关键词： 灰霉病菌;Ⅺ型组氨酸激酶;BcHK91;功能研究;转录组

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2025 年 65 卷 011 期

页码： 5054-5073

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]探索灰霉病菌中Ⅺ型组氨酸激酶基因的功能,为进一步阐明组氨酸激酶(histidine kinases,HKs)相关基因在植物病原菌生长发育和致病过程中的分子机制奠定基础.[方法]利用敲除载体构建、根癌农杆菌介导的转化(Agrobactirium tumfacience-mediated transformant,ATMT)、PCR及qPCR验证技术获得BcHK91 基因敲除突变体.通过对菌落生长、菌核形成、孢子产量及形态、孢子萌发率、附着胞与侵染垫形成率、致病力、细胞壁与细胞膜完整性以及转录组进行测定,探究敲除该基因后对灰霉病菌B05.10 的影响,从而明确BcHK91 的功能.[结果]成功获得 2 个BcHK91 基因敲除突变体,分别命名为ΔBcHK91-A与ΔBcHK91-B.表型分析发现,与野生型菌株B05.10 和异位插入菌株(ectopic transformants,ET)相比,BcHK91 基因敲除突变体不产生菌核,孢子长度缩短,产孢能力、孢子萌发率、附着胞形成率、侵染垫形成率及致病力均下降,对刚果红和SDS的敏感性升高.利用RNA sequencing(RNA-seq)技术对野生型菌株和突变体ΔBcHK91 的转录组进行比较分析,结果表明共有 1 533 个差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),其中 1 017 个基因上调,516 个基因下调.基因本体(gene ontology,GO)和直系同源簇(cluster of orthologous group,COG)注释分析表明,DEGs 主要富集在生物过程(biological processes)中的细胞过程(cell process)与代谢过程(metabolic process);细胞组成(cellular components)主要分布在细胞结构体(cellular anatomical entity)和细胞内(intracellular);分子功能(molecular functions)主要富集在催化活性(catalytic activity)、蛋白质结合(binding)和转运活性(transporter activity).Kyoto encyclopedia of genes and genomes(KEGG)通路分析表明,DEGs主要富集在碳水化合物运输、淀粉和蔗糖代谢通路、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)级联反应的代谢通路上,参与调控突变体表型与致病性.差异表达基因的in silico分析揭示,17个基因可能参与调控B05.10 的生长发育、氧化应激、细胞壁合成、细胞膜完整性、菌核形成和致病性.qPCR验证结果表明,13 个基因的qPCR表达水平与转录组测序获得的数据趋势一致,表明该转录组数据可信度较高.[结论]灰霉病菌中BcHK91 主要在菌体无性繁殖、应对不同环境胁迫及致病过程中发挥重要作用.