文献类型: 中文期刊
作者: 张树珍 1 ; 汤火龙 2 ; 杨本鹏 2 ; 刘飞虎 1 ;
作者机构: 1.云南大学生命科学与化学学院
2.中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室
关键词: 康乃馨;ACC氧化酶;RT-PCR;反义植物表达载体
期刊名称: 云南植物研究
ISSN: 0253-2700
年卷期: 2002 年 24 卷 06 期
页码: 775-780
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 以康乃馨 (DianthuscaryophyllusL .)花瓣为材料 ,用改进的异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,根据已报道的康乃馨ACC氧化酶 (1 aminocyclopropane 1 carboxylicacidoxidase ,ACO)基因的序列设计并合成一对引物 ,通过RT PCR方法获得一约 1 2kb特异片段 ,把该片段连接到pGEM(R) Teasyvector上进行测序 ,其全长共 115 6bp ,编码区 915bp ,共编码 30 4个氨基酸残基。序列分析结果表明该序列与GenBankL35 15 2中的康乃馨ACC氧化酶基因的cDNA序列完全相符 ,推断该基因在康乃馨种内可能是完全或高度保守的。随后将此片段反向插入植物表达载体pBI12 1的 35S启动子和NOS终止子之间 ,构建了一反义植物表达载体pBO ;又把花特异表达启动子PchsA插入pBI12 1的HindIII +Xbal位点构建中间载体pCHB ,再把康乃馨ACC氧化酶基因反向插入中间载体pCHB的XbaI +Sst1位点构建成另一反义植物表达载体pCBO。
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