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木薯14-3-3蛋白家族成员MeGRF3基因的原核表达及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 常丽丽 1 ; 王丹 1 ; 彭存智 1 ; 徐兵强 1 ; 仝征 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词： 木薯;14-3-3蛋白家族;原核表达;多克隆抗体;Western blot

期刊名称： 西北植物学报

ISSN： 1000-4025

年卷期： 2020 年 003 期

页码： 375-381

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 14-3-3蛋白是植物体内重要的信号转导调节分子,在碳代谢、逆境胁迫响应、生长发育等过程中发挥重要调控作用.为了深入解析14-3-3蛋白家族在木薯中的生物学功能,该研究采用酶切连接方法构建木薯14-3-3蛋白家族成员MeGRF3的原核表达载体,用热激法转化大肠杆菌Rosetta (DE3)株系,诱导表达带有MeGRF3的融合蛋白;使用纯化后的MeGRF3融合蛋白免疫新西兰公兔制备多克隆抗体,并检测抗体的效价和特异性.结果显示:(1)成功构建了木薯MeGRF3的原核表达载体pET-30a-MeGRF3,并诱导表达得到带有MeGRF3和6个His标签的融合蛋白.(2)MeGRF3融合蛋白主要以包涵体的形式存在,相对分子质量约为33 kD.(3)间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)测定的抗体效价为1 024 000.(4)Western blot分析显示,木薯叶片、茎尖、茎皮和块根中均检测到与MeGRF3蛋白大小一致的条带,说明MeGRF3在这4个组织器官中均表达,但主要是在茎尖和块根中大量积累,表明该研究成功制备的MeGRF3多克隆抗体的特异性较好.

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