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橡胶树酵母双杂交文库构建及HbTRXy2互作蛋白筛选

文献类型: 中文期刊

作者: 吴双 1 ; 逯锐琳 1 ; 何其光 1 ; 袁坤 1 ; 胡义钰 1 ; 王真辉 1 ; 刘进平 2 ; 刘辉 1 ;

作者机构: 1.中国热带农业科学院橡胶研究所/农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地–海南省热带作物栽培生理学重点实验室

2.海南大学热带农林学院

关键词: 橡胶树;硫氧还蛋白;酵母双杂交;酵母文库构建;互作蛋白

期刊名称: 热带作物学报

ISSN: 1000-2561

年卷期: 2025 年 46 卷 006 期

页码: 1279-1287

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 硫氧还蛋白通过催化硫醇-二硫键交换反应调节靶蛋白的结构和功能,在维持细胞氧化还原稳态中发挥关键作用。前期研究证实橡胶树y型硫氧还蛋白HbTRXy2具有很强的抗氧化功能。为探究HbTRXy2调控抗氧化性的分子机制,本研究构建橡胶树酵母双杂交文库及HbTRXy2诱饵载体pGBKT7-HbTRXy2,并通过酵母双杂交筛选与HbTRXy2互作的蛋白。结果显示:本研究构建的次级文库重组率为100%,插入片段平均长度大于1000bp,库容量为3.80×10~6 CFU/mL;经检测,诱饵载体pGBKT7-HbTRXy2在酵母中无毒性和自激活活性,可用于酵母双杂交筛选;采用共转化法从构建的文库中筛选到与HbTRXy2互作的蛋白24个。生物信息学分析表明,这些候选互作蛋白的功能涉及氧化还原、逆境胁迫响应、ATP结合与代谢、卡尔文循环、单碳代谢、碳固定、蛋氨酸生物合成、脂质A生物合成、金属离子结合或转运、跨膜转运、细胞体积调控、磷酸根离子稳态、蛋白质磷酸化和蛋白质折叠等。本研究结果为深入解析HbTRXy2在橡胶树中的功能及其作用机理奠定基础。

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