文献类型： 中文期刊

作者： 朱海生 ¹ ; 刘建汀 ¹ ; 温文旭 ¹ ; 叶新如 ¹ ; 王彬 ¹ ; 李永平 ¹ ; 陈敏氡 ¹ ; 林珲 ¹ ; 温庆放 ¹ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院作物研究所福建省农业科学院蔬菜研究中心福建省蔬菜工程技术研究中心

关键词： 美洲南瓜;内参基因;α-微管蛋白;表达分析

期刊名称： 中国细胞生物学学报

ISSN： 1674-7666

年卷期： 2018 年 12 期

页码： 2040-2050

收录情况： CSCD

摘要： 为了获得美洲南瓜α-tubulin基因,并设计合适的荧光定量PCR内参引物,该研究通过转录组测序和RT-PCR方法获得了1条长达1 863 bp的c DNA,命名为CpTUA, GeneBank登录号为:MH310440。生物信息学分析表明,该序列包含1个开放读码框(open reading frame, ORF),大小为1353 bp,预测共编码450个氨基酸,理论分子大小约为49.57 kDa,蛋白质等电点为4.84。Motif Scan分析显示, CpTUA蛋白质的氨基酸序列49―246位和248―393位分别为Tubulin和Tubulin-C保守区域。同源性分析表明,基因编码的蛋白质与同为南瓜属的中国南瓜和印度南瓜同源蛋白的相似性达到99%,具有高度的保守性。在此基础上,设计了1对的荧光定量PCR引物,该引物具有较高的特异性和重复性。RT-PCR和qRT-PCR分析表明, CpTUA基因在美洲南瓜不同组织和不同胁迫处理下均能稳定表达,适合在美洲南瓜基因表达研究中作为内参基因。该研究为开展美洲南瓜重要功能基因的表达模式和调控机制的研究奠定基础。