文献类型： 中文期刊

作者： 张明明 ¹ ; 刘丽华 ¹ ; 赵建宗 ¹ ; 张力科 ¹ ; 刘阳娜 ¹ ; 李宏博 ¹ ; 张风廷 ¹ ; 姚骥 ¹ ; 庞斌双 ¹ ; 赵昌平 ¹ ;

作者机构： 1.北京农学院植物科学技术学院;北京市农林科学院北京杂交小麦工程技术研究中心杂交小麦分子遗传北京市重点实验室;全国农业技术推广服务中心;先正达生物科技(中国)有限公司

关键词： 小麦;种子;DNA提取;高盐低pH;PCR反应体系;优化

期刊名称： 中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2019 年 07 期

页码： 161-169

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以小麦种子分子检测农业行业标准(NY/T 2859-2015)为基础,开发小麦种子快速、规模化提取DNA方法,优化反应体系中各组分含量,为小麦真实性快速执法提供技术支撑。通过对SDS、CTAB、高盐低p H、快速提取和试剂盒5种方法提取的DNA质量、浓度和PCR扩增效果进行比较,发现改进的高盐低p H方法提取种子的DNA质量、浓度能够满足小麦真实性鉴定中42对SSR引物重复鉴定的需求,是利用96孔深孔板和自动化移液工作站规模化、高通量提取DNA的较优方法。进一步优化结果显示该方法在65℃温浴条件下比室温的浓度高出25%,但两种温度条件下提取的DNA质量及浓度均能够满足品种鉴定的需求;沉淀时用0.5倍提取液体积的预冷异丙醇沉淀浓度最高,用室温的异丙醇沉淀的最佳体积是提取液体积的0.6倍。对标准中42对引物的最佳引物浓度和模板浓度均进行了优化,综合所有42对引物的优化结果发现,反应体系为20μL时,引物终浓度为0.437 5μmol/L,模板终浓度为10 ng/μL时扩增效率相对较高,扩增产物稳定,能够满足多重电泳的需求。