文献类型： 中文期刊
作者： 蒋桂芳 1 ; 宋力 2 ; 黄俊生 3 ;
作者机构： 1.重庆文理学院生命科学系
2.重庆文理学院生物化学与环境科学系
3.中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
关键词： 淡紫拟青霉菌;PL基因;原核表达;抗血清;ELISA
期刊名称： 安徽农业科学
ISSN： 0517-6611
年卷期： 2008 年 36 卷 25 期
页码： 10783-10784+10814
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： [目的]探索利用大肠杆菌进行丝氨酸蛋白酶PL基因的克隆与表达及抗血清制备的方法。[方法]根据报道的PL蛋白基因序列设计1对引物,通过RT-PCR扩增获得PL基因片段,对重组载体进行构建、鉴定和序列分析,用表达的特异蛋白条带制备抗原,免疫家兔制备抗血清。[结果]通过RT-PCR扩增得到长约850 bp的PL基因片段,将其克隆到原核表达载体pET-22b(+)中,获得的重组子pET-22b-PL转化E.coliBL21(DE3),经最终浓度为1 mmol/L IPTG诱导37℃培养4 h,获得约31 kDa大小的重组蛋白。SDS-PAGE电泳分析表明,该蛋白表达量占菌体总蛋白的60%,说明该蛋白得到了高效表达。用表达的特异蛋白条带制备的免疫家兔制备抗血清,经ELISA测定效价为1/10 000。[结论]通过基因重组可获得PL基因在大肠杆菌中的高效表达蛋白,且该蛋白具有较高的免疫活性。
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