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抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因定点突变及其对大肠杆菌中表达的影响

文献类型： 中文期刊

作者： 朱建清 1 ; 刘柱 1 ; 胡新文 2 ; 杨志荣 1 ;

作者机构： 1.四川大学生命科学学院

2.中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室

关键词： 萝卜抗真菌蛋白(Rs-AFP_2);定点突变;密码偏爱性;表达

期刊名称： 高技术通讯

ISSN： 1002-0470

年卷期： 2003 年 13 卷 04 期

页码： 18-23

收录情况： EI ; CSCD

摘要： 为了研究遗传密码子对表达调控的影响,利用PCR重叠延伸法,对萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因编码序列区的部分核苷酸进行沉默突变,构建突变体Rs-AFPm。序列分析表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码的蛋白由29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白组成。突变体与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码子Arg相差两个碱基(CAG→CGA)。重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因与原核表达载体pET-21b(+)分别重组到大肠杆菌BL21菌株。IPTG诱导后,二者均得到了表达。软件分析显示,突变前pETAFPo表达产物占全菌蛋白的3％,突变后pETAFPm的表达产物占全菌蛋白含量的8％;表达蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经超声波破碎后,蛋白质复性,抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效地提高表达量。

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