文献类型： 中文期刊

作者： 叶华虎 ¹ ; 刘彦 ² ; 刘珠果 ¹ ; 宋维平 ² ; 卢建申 ¹ ; 周艳荣 ¹ ; 绳纪坡 ¹ ; 邓继先 ¹ ;

作者机构： 1.军事医学科学院生物工程研究所

2.北京市农林科学院畜牧兽医研究所

关键词： 外源DNA;结合;内化;精子;山羊

期刊名称： 遗传

ISSN： 0253-9772

年卷期： 2006 年 28 卷 06 期

页码： 659-664

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 外源DNA与精子相互作用后的定位及内化率是精子载体法制备转基因动物的关键环节。实验以标记的DNA片段为示踪材料,就精子与外源DNA相互作用的基本特征及影响因素进行了研究。结果表明:山羊精子可自发性结合外源DNA,外源DNA最初结合于顶体后区质膜外表面,随后部分内化进入细胞内。精子对外源DNA的结合和内化能力随供体的不同而差异明显,在实验所检查的35只公羊中,结合率(DNaseⅠ消化前)波动于4.6%~62.4%,内化率(DNaseⅠ消化后)波动于2.1%~53.8%,个体间差异显著(P<0.01)。对于同一供体的精子而言,阻止DNA结合的最主要因素是精浆,与射出的原精液相比,洗涤后精子的结合率和内化率分别提高了3倍和5倍;其次精子获能也将导致结合率和内化率降低(P<0.01)。死精子不能完成外源DNA的内化过程,但反复冻融导致质膜破裂的死精子具有更高的结合率,而且阳性率与动物个体无关。上述结果提示,筛选合适的精子供体,采用优化的转染处理方法是提高精子载体方法效率的前提和保证。