文献类型： 中文期刊
作者： 杨坤 1 ; 吴学龙 2 ; 朗春秀 2 ; 陈锦清 2 ;
作者机构： 1.浙江师范大学化学与生命科学学院
2.浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所
关键词： 反向PCR;侧翼序列;改良CTAB法;转基因油菜
期刊名称： 安徽农业科学
ISSN： 0517-6611
年卷期： 2010 年 38 卷 10 期
页码： 44-47
收录情况： 北大核心
摘要： [目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用改良CTAB法提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再通过两轮巢式PCR扩增,进行序列对比。[结果]两轮巢式PCR扩增得到1个大小为4.0kb的片段,其序列与油菜数据库中BH652424和BZ044084两序列同源性分别高达97.8%和63.4%。根据序列比对结果设计特异引物对进行PCR验证的结果,也证明了FS4转基因油菜中T-DNA的确插入在该位点。[结论]优化后的IPCR条件能成功分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。
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