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褐飞虱类酵母共生菌菌体蛋白质提取方法的比较

文献类型： 中文期刊

作者： 张海强 1 ; 陈建明 2 ; 张珏锋 3 ;

作者机构： 1.杭州师范大学生命与环境科学学院

2.浙江省植物有害生物防控重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地

3.浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所

关键词： 植物保护学;褐飞虱;类酵母共生菌;菌体蛋白质;提取方法

期刊名称： 浙江农林大学学报

ISSN： 2095-0756

年卷期： 2015 年 32 卷 02 期

页码： 173-180

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了筛选出适合褐飞虱Nilaparvata lugens类酵母共生菌蛋白质提取的细胞破碎方法,选择超声波破碎法、反复冻融法和液氮研磨法等3种细胞破碎方法提取共生菌吡虫啉敏感菌株和抗性菌株蛋白质。结果表明:菌体显微形态观察发现,使用超声波破碎法和液氮研磨法处理类酵母共生菌的细胞破碎效果均优于反复冻融法,处理后菌体分布均匀,破碎彻底;72 h是提取菌体蛋白质的最佳培养时间。定量分析表明:用超声波破碎法提取蛋白质质量浓度最高,液氮研磨法次之,反复冻融法提取蛋白质质量浓度的效果最差,各方法所提蛋白质质量浓度差异显著(P<0.05)。培养72 h后,超声波破碎法、液氮研磨法和反复冻融法提取的蛋白质质量浓度分别为2.82 g·L-1,2.62g·L-1和2.12 g·L-1(敏感菌株)及2.64 g·L-1,2.53 g·L-1和2.05 g·L-1(抗性菌株)。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分析发现:超声波破碎法获得的蛋白质不仅得率高,且条带清晰,丰度好。液氮研磨法虽得率高,但蛋白质部分降解,条带不清晰;而反复冻融法获得的蛋白质得率最低。超声波破碎法更适合于褐飞虱类酵母共生菌的蛋白质提取,该研究为后续蛋白质的双向电泳实验和分离差异蛋白质提供技术支撑。

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